熒光分子可以說(shuō)是生物學(xué)研究中最經(jīng)常使用的標(biāo)記分子，它們作為探針標(biāo)記目標(biāo)分子，可用于監(jiān)測(cè)其表達(dá)量及示蹤。它們相對(duì)于放射性同位素更加安全和環(huán)保，相對(duì)于不發(fā)光的標(biāo)記物如HRP或金屬顆粒等更加靈敏。因而應(yīng)用非常廣泛。下面我們將從熒光的發(fā)光原理開(kāi)始，簡(jiǎn)單介紹免疫熒光（IF）和流式細(xì)胞術(shù)（FCM）的應(yīng)用。

    熒光物質(zhì)發(fā)光原理：光照射到某些原子時(shí)，光的能量使原子核周圍的一些電子由原來(lái)的軌道躍遷到了能量更高的軌道，即從基態(tài)躍遷到第一激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等。第一激發(fā)單線態(tài)或第二激發(fā)單線態(tài)等是不穩(wěn)定的，瞬間將恢復(fù)基態(tài)，當(dāng)電子由第一激發(fā)單線態(tài)恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，能量會(huì)以光的形式釋放，產(chǎn)生熒光。

   每一種熒光物質(zhì)都有其特定的激發(fā)光譜（Excitation）和發(fā)射光譜（Emission）。通常以相對(duì)強(qiáng)度為縱軸，以波長(zhǎng)為橫軸，這些吸收光譜和發(fā)射光譜有很好的對(duì)應(yīng)關(guān)系。激發(fā)光譜是固定發(fā)射光的波長(zhǎng)，測(cè)量激發(fā)光的波長(zhǎng)（有時(shí)候也測(cè)波數(shù)或者頻率等）與熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系；發(fā)射光譜是固定激發(fā)波的波長(zhǎng)，測(cè)定發(fā)射光強(qiáng)度與波長(zhǎng)的關(guān)系。熒光物質(zhì)的發(fā)射波長(zhǎng)總是大于其激發(fā)波長(zhǎng)。 兩者的差值即為斯托克斯位移。