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山羊GnRH elisa檢測試劑盒夾心法

發(fā)表時間:2025-05-14
山羊GnRH elisa檢測試劑盒夾心法:
(一)雙抗體夾心法
將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體;加入待測樣本,孵育使樣本中的抗原與固相抗體充分反應,形成固相抗體-抗原復合物,之后洗滌除去其他未結合物;加入標記特異性抗體并孵育,使標記抗體與固相抗體-抗原復合物結合,形成固相抗體-抗原-標記抗體復合物(雙抗體夾心),洗滌除去未結合的標記抗體;*根據(jù)不同的方法學,加入不同的反應物質(如酶促底物、堿性溶液、氧化劑等),得到反應信號;讀取信號,根據(jù)預先設定的COV或標準曲線,進行定性或定量的結果判讀。
雙抗體夾心法易受干擾。常見的干擾物質包括人抗動物抗體(HA)和類因子(RF),可造成假陰性及假陽性結果。在診斷檢測過程中,HA可結合多種類型的無關抗原,從而干擾抗原-抗體的特異性結合反應,如一個干擾抗體分子分別與固相抗體及標記抗體結合,盡管樣本中沒有待測抗原的存在,標記抗體通過干擾抗體連接到固相抗體,在洗滌過程中不會被洗去,因此產生了相應的信號,造成假陽性結果;或干擾抗體分別與固相抗體及標記抗體結合,占據(jù)固相抗體與標記抗體上的特異性結合位點,造成無法產生相應的信號,造成假陰性結果。
(二)雙抗原夾心法
原理與雙抗體夾心法類似,特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗原;加入待測樣本,孵育使樣本中的抗原與固相抗體充分反應,形成固相抗原-抗體復合物,洗滌除去未結合物質;加入標記特異性抗原并孵育,是標記抗原與固相抗原-抗體復合物結合,形成固相抗原-抗體-標記抗原復合物(雙抗原夾心),洗滌除去未結合的標記抗原,加入反應物質,判讀結果。
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