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小鼠胚胎干細胞CE3（干細胞庫保藏）培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　小鼠胚胎干細胞CE3（干細胞庫保藏）培養(yǎng)
種屬:CE3

類型:小鼠胚胎內(nèi)細胞團

形態(tài):球形*

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:mES完全培養(yǎng)液配方（600 ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES級FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl（終濃度為1000U/ml） β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是小鼠胚胎干細胞CE3（干細胞庫保藏）培養(yǎng)的相關熱銷產(chǎn)品：
隱色孔雀石綠（標準品）質(zhì)量規(guī)格：分析標準品Leucomalachite Green  rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISA試劑盒兔子C反應蛋白(CRP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  可溶性CD30配體(sCD30L)ELISA試劑盒 ，英文名： sCD30L ELISA Kit

二十酸甲酯（標準品）質(zhì)量規(guī)格：≥98.0%(GC)Methyl Arachidate  小鼠雌激素受體β(ERβ)ELISA試劑盒 ，英文名： ERβ ELISA Kit  ratEndothelin1,ET-1ELISA試劑盒大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

反式玉米素質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)trans-Zeatin  人優(yōu)球蛋白(EL)ELISA檢測試劑盒HumanEuglobulinLysis,ELELISAKit 96T/48T  HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISA試劑盒人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

氯亞鉑酸鉀 質(zhì)量規(guī)格：BR,鉑含量 ≥46%,原始鉑粉度＞99.95% Dipotassium tetrachloroplatinate  大鼠卵泡抑素(FS)試劑盒 Rat Follistatin,FS ELISA Kit  HumanHeatShockProtein40，HSP-40ELISAKit人熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠著絲粒蛋白H(CENPH)ELISA試劑盒 ，英文名： CENPH ELISA Kit  異連翹苷規(guī)格  Isoforsythiaside

內(nèi)皮細胞生長因子受體-3(VEGFR-3)ELISA檢測試劑盒MonkeyVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3ELISAkit 96T/48T  6817-41-0異蓮心堿   Isoliensinine

犬繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)試劑盒 Canine Mullerian Inhibiting Substance/Ai-Mullerian Hormone,MIS/AMH ELISA Kit  2450-53-5異綠原酸A說明書  Isochlorogenic acid A

英文名稱HumanniicoxidesyhaseELISAKIT人合成酶(NOS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  14534-61-3異綠原酸B品牌  Isochlorogenic acid B

化微粒體1脂酶D(PhospholipaseD)總活性熒光定量檢測試劑盒20  32451-88-0異綠原酸C規(guī)格  Isochlorogenic acid C
27215-14-1新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格  Neoandrographolide    英文名稱Ratt-PAELISAKit大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)規(guī)格：96T/48T

27215-14-1新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格  Neoandrographolide   英文名稱Ratt-PAELISAKit大鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)規(guī)格：96T/48T

27210-57-7新丹參酮   miltirone  英文名稱RattotalhemolyticcomplemeELISAKit大鼠總溶血補體(CH50)規(guī)格：96T/48T

27210-57-7丹參新酮說明書  Miltirone   英文名稱RattotalhemolyticcomplemeELISAKit大鼠總溶血補體(CH50)規(guī)格：96T/48T

27208-80-6虎杖苷品牌  Polydatin   英文名稱RatTissuePolypeptideAigenELISAKit大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISAKit規(guī)格：96T/48T
小鼠胚胎干細胞CE3（干細胞庫保藏）培養(yǎng)小鼠載脂蛋白H(APOH)ELISA試劑盒 ，英文名： APOH ELISA Kit  28831-65-4紫草酸規(guī)格  lithospermic acid

猴可溶性細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA檢測試劑盒Monkeysolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit 96T/48T  81907-62-2靈芝酸A   Ganoderic Acid A

犬結締組織生長因子(CTGF)試劑盒 Canine connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit  33783-82-3HederacolchisideE說明書  Hederacolchiside E

英文名稱HumahrombomodulinELISAKit人調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  68027-15-64補充中2品牌  hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside

化線粒體凍存液(酶學和膜結構保護)50毫升  848784-87-24補充中3規(guī)格  Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[ D-glucopyranosyl(1→4)[ L-rhamnopyranosyl) (1→2)-L-arabinopyranosyl]oxy], (3,4)-)
收到小鼠胚胎干細胞CE3（干細胞庫保藏）培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。