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昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)
種屬:昆明白MEF

類型:取孕12.5天的昆明白小鼠的胚胎制備獲得

形態(tài):成纖維細(xì)胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:MEF細(xì)胞完全培養(yǎng)基（100 ml）： DMEM (Invitrogen, 12430) 88 ml FBS (Biochrom, S4115) 10 ml Glutamax (Invitrogen, 35050) 1 ml Non-essential Amino Acids, 100×(Invitrogen, 11140) 1 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
知母皂苷BII（標(biāo)準(zhǔn)品）Timosaponin BII質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  人抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒 human thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit  人緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2',3'-二脫氧鳥苷(ddG)2',3'-Dideoxyguanosine質(zhì)量規(guī)格：>97%,進(jìn)分  rabbitthyroxine,T4ELISAKit兔子甲狀腺素(T4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  豬神經(jīng)型合成酶(nNOS)試劑盒 Pig Neuronal Niic Oxide Syhase,nNOS ELISA Kit

知母皂苷E(標(biāo)準(zhǔn)品)Anemarsaponin E質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  載玻片細(xì)胞CDK6蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20  HumanCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 人Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

植酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Phytic acid質(zhì)量規(guī)格：UV≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品  Humanβai-galactanproteinsIgGELISA試劑盒人β乳糖蛋白抗體IgGELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  Humanmalondialchehyche,MDAELISA試劑盒人二(MDA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
犬β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA檢測試劑盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T  104-46-1反式茴香腦品牌  Anethole

犬胸腺肽α1(Thymosin α1)試劑盒 Canine Thymosin α1 ELISA Kit  33889-68-8防己諾林堿規(guī)格  Fangchinoline

英文名稱HumaissuefactorELISAKit人組織因子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  518-34-3粉防己堿   Tetrandrine

超敏型HRP-TMB底物顯色試劑盒10/50  19906-72-0蜂斗菜內(nèi)酯說明書  Bakkenolide

Ratglucocoicoid,GCELISA試劑盒大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  484-20-8佛手柑內(nèi)酯品牌  Bergapten；5-Methoxypsoralen
64809-67-2新芒果苷品牌  Neomangiferin  組蛋白H2B-K46甲基化(di)檢測試劑盒10/20等

64657-21-2異佛司可林   Isoforskolin   組蛋白H2B-K16乙?；瘷z測試劑盒10/20等

64461-95-6胡黃連苷III品牌  Picroside III   組蛋白H2B-K12乙?；瘷z測試劑盒10/20等

64439-81-210-羥基喜樹堿品牌  10-Hydroxycamptothecin   組蛋白H2B-K120乙?；瘷z測試劑盒10/20等

64421-28-9山梔苷甲酯說明書  Shanzhiside methylester   組蛋白H2A-T1291酸化檢測試劑盒10/20等
昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)產(chǎn)氣莢膜梭菌α(Closidiumperfringenscpa)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20  865-21-4長春花堿說明書   Vinblastine

RatFreeProstateSpecificAigen,fPSAELISA試劑盒大鼠游離特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  71486-22-1長春瑞濱品牌  Vinorelbine

小鼠組蛋白H3(H3)ELISA試劑盒 ，英文名： H3 ELISA Kit  57-22-7長春新堿規(guī)格  Vincristine

山羊壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測試劑盒GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 96T/48T  2468-21-5長春質(zhì)堿   Catharanthine

犬葉酸(FA)試劑盒 Canine Folic acid,FA ELISA Kit  14216-03-6常春藤苷C說明書  Hederacoside C
收到昆明白小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（干細(xì)胞庫保藏）形態(tài)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。