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培養(yǎng)操作步驟：
轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞形態(tài)1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)； 
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。產(chǎn)品僅用于科研 

資源名稱　轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞
類型:貼壁

分離基物人。肝上皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化；男性

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

傳代方法:Protocol: 1.Remove and discard culture medium. 2.Briefly rinse the cell layer with PBS solution to remove all traces of serum that contains trypsin inhibitor. 3.Add 1.0 ml of 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed（about 3-5 min）. Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach. Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal. 4.Add 6.0 to 8.0 ml of complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting. 5.Add appropriate aliquots of the cell suspension to new culture vessels. 6.Incubate cultures at 37°C. Subcultivation ratio: A subcultivation ratio of 1:2 to 1:4 is recommended Medium renewal: 2 times per week

生長(zhǎng)條件:Complete growth medium: 1640，90%；FBS，10%；雙抗。 Temperature: 37.0°C Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

存儲(chǔ)條件:Freeze medium: FBS/NBS, 92%; DMSO, 8% Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用*化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。
6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)可提供大量、同一時(shí)期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。
以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
仲辛醇(Standard for GC,≥99.5%(GC))2-Octanol質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)  人抗型肝炎病毒抗體(ai-HCV)試劑盒 Human ai-hepatitis C virus(HCV)aibody ELISA Kit  人緊張素Ⅱ轉(zhuǎn)化酶(ACEⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

二十八烷(standard for GC,≥98.5%(GC))Octacosane質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥98.5%(GC)  rabbitTissuefactor,TFELISAKit兔子組織因子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  豬神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)試劑盒 Pig glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit

草酸(Standard for GC,≥99.6%)Oxalic acid dihydrate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.6%  載玻片細(xì)胞CYP1A2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  HumanN-terminalprocollagenⅢpropeptide,PⅢNPELISAKit 人Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

正十五烷（標(biāo)準(zhǔn)品）N-PENTADECANE質(zhì)量規(guī)格：內(nèi)標(biāo)  Humanβcatenin,β-CatELISA試劑盒人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  HumanmammarycarcinomaMarker-CA153ELISA試劑盒人癌標(biāo)志物-CA153ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
貓細(xì)小病毒抗體(FPV)ELISA檢測(cè)試劑盒Felisparvovirus,FPVELISAKit 96T/48T  539-86-6大蒜素品牌  Allicin

犬血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)試劑盒 Canine serum amyloid A2,SAA2 ELISA Kit  55481-88-4大葉茜草素規(guī)格  Rubimaillin

英文名稱MouseAILR3ELISAKIT小鼠AILR3規(guī)格：96T/48T  122021-74-3丹參酚酸B甲酯廠家  Monomethyl lithospermate B 

腸胃活檢螺旋桿菌(H.PYLORI)吉姆薩(GIEMSA)染色試劑盒50  22681-72-7丹參素說(shuō)明書  Danshensu

RatGATAbindingprotein4,GATA4ELISA試劑盒大鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  67920-52-9丹參素鈉品牌   Danshensu
74285-86-2雷酚內(nèi)酯品牌  Triptophenolide    組織1酸二酯酶2(PDE2)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒10

74285-86-2雷酚內(nèi)酯品牌  Triptophenolide   組織1酸二酯酶2(PDE2)活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒10

73-31-4褪黑素說(shuō)明書  Melatonin  組織1酸二酯酶1(PDE1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒10

73069-14-4白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ品牌  2-Atractylenolide   組化染色操作20樣本

73-03-0蟲草素說(shuō)明書  cordycepin   組分氧化應(yīng)激活性氧(ROS)魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50
轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞形態(tài)RatImmunoglobulinE,IgEELISA試劑盒大鼠球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  29702-25-8異牡荊苷廠家  Isovitexin

小鼠長(zhǎng)停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)ELISA試劑盒 ，英文名： gas-6 ELISA Kit  486-21-5異嗪皮啶說(shuō)明書  Isofraxidin

小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseEndomeiumAibody,EMAbELISAKit 96T/48T  51014-29-0異去氫鉤藤堿品牌  Isocorynoxeine

人巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒 Human M-CSF ELISA kit  480-19-3異鼠李素規(guī)格  Isorhamnetin

RatAlternativemacrophageactivation-associatedCCchemokine1,AMAC-1ELISAKit大鼠巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  55033-90-4異鼠李素-3-O-新橙皮苷廠家  Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside
操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動(dòng),使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長(zhǎng)至60%～70%融合時(shí)，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進(jìn)一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴(kuò)增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計(jì)數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計(jì)數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計(jì)算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。產(chǎn)品僅用于科研
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)后分別接種于12個(gè)25cm2培養(yǎng)瓶中，每?jī)尚r(shí)隨機(jī)取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計(jì)數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計(jì)算貼壁率。 
1.6 生長(zhǎng)曲線 取指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機(jī)取3孔，計(jì)數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計(jì)算平均值。連續(xù)計(jì)數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線
轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞形態(tài)來(lái)源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實(shí)驗(yàn)等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，可無(wú)菌操作并提供相關(guān)科研項(xiàng)目解決方案以及實(shí)驗(yàn)服務(wù)。