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HSF（DMEM(高糖）+15%FBS 胎牛） 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱(chēng)　HSF（DMEM(高糖）+15%FBS 胎牛）
種屬:完全培養(yǎng)基

提供形式:500ml

模式菌株:未知
細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是HSF（DMEM(高糖）+15%FBS 胎牛） 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
豬去氧膽酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Hyodeoxycholic acid質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定  冰凍組織固著液50毫升  HumanSolubleprotein-100,S-100ELISAKit 人S100蛋白(S-100)ELISA試劑盒 96T/48T 分裝

制霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Nystatin質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定  Ratferritin,FEELISA試劑盒大鼠鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/HLA-ⅡELISA試劑盒人主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(lèi)(MHCⅡ/HLA-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

磺芐西林（標(biāo)準(zhǔn)品）SULBENICILLIN質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定  小鼠組織金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP2)ELISA試劑盒 ，英文名： TIMP2 ELISA Kit  組織緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量檢測(cè)試劑盒20

乙酰螺旋霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Acetylspiramycin質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定  鴨主要組織相容性復(fù)合體(MHC)ELISA檢測(cè)試劑盒Duckmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T  HumanHemoglobinH,HbHELISAKit人血紅蛋白H(HbH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
產(chǎn)氣莢膜梭菌α(Closidiumperfringenscpa)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20  865-21-4長(zhǎng)春花堿說(shuō)明書(shū)   Vinblastine

RatFreeProstateSpecificAigen,fPSAELISA試劑盒大鼠游離特異性抗原(fPSA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  71486-22-1長(zhǎng)春瑞濱品牌  Vinorelbine

小鼠組蛋白H3(H3)ELISA試劑盒 ，英文名： H3 ELISA Kit  57-22-7長(zhǎng)春新堿規(guī)格  Vincristine

山羊壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測(cè)試劑盒GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 96T/48T  2468-21-5長(zhǎng)春質(zhì)堿   Catharanthine

犬葉酸(FA)試劑盒 Canine Folic acid,FA ELISA Kit  14216-03-6常春藤苷C說(shuō)明書(shū)  Hederacoside C
80681-45-4升麻素苷   Prim-O-glucosylcimifugin  組織BMK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

80681-44-3亥茅酚苷   Sec-O-Glucosylhamaudol   組織BLK激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20

80665-72-1附子靈說(shuō)明書(shū)  Fuziline   組織a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20

80418-25-3三七皂苷R2(S型)規(guī)格  20(S)-NotoginsenosideR2   組織a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性EPS-G7酶偶聯(lián)比色法定量檢測(cè)試劑盒20

80418-24-2三七皂苷R1說(shuō)明書(shū)  Notoginsenoside R1  組織a-淀粉酶(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量檢測(cè)試劑盒20
HSF（DMEM(高糖）+15%FBS 胎牛） Ratheatshockprotein20,hSP-20ELISA試劑盒大鼠熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  毛冬青皂苷B3   ilexsaponin B3

小鼠受體超家族成員4(TNFRSF4)ELISA試劑盒 ，英文名： TNFRSF4 ELISA Kit  110026-03-4牛磺豬去氧膽酸說(shuō)明書(shū)   Taurohyodeoxycholic acid  salt hydrate

犬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISA檢測(cè)試劑盒Canineacetylcholinereceptoraibody,AChRabELISAKit 96T/48T  140369-76-2異型南五味子丁素品牌  Heteroclitin D

犬視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP-4)試劑盒 Canine Retinol binding protein 4,RBP-4 ELISA Kit  125675-09-4苦蒿素規(guī)格  Blinin

英文名稱(chēng)HumanLaminaPropriaLymphocyteELISAKit人脂蛋白脂酶(LPL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  486-62-4芒柄花苷   Ononin
收到HSF（DMEM(高糖）+15%FBS 胎牛） 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。