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恒河猴腎細胞培養(yǎng)冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　恒河猴腎細胞培養(yǎng)
種屬:LLC-MK2

培養(yǎng)方法

生長特性:貼壁生長
細胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是恒河猴腎細胞培養(yǎng)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
非洲綠猴腎細胞系/HCV-E1;Vero-HCV-E1奈帕芬胺(標準品)質(zhì)量規(guī)格：>99%,標準品Nepafenac

FGF9 Others Human 人 FGF9 人細胞裂解液 (陽性對照) 尼卡巴嗪 質(zhì)量規(guī)格：>98%Nicarbazin

KM小鼠子瘤株;U14馬來酸依那普利質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USPEnalapril Maleate

PROCR Others Mouse 小鼠 Epcr / PROCR 人細胞裂解液 (陽性對照) 馬來酸依那普利（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標準品Enalapril Maleate

Caki 人腎透明細胞癌細胞氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細胞培養(yǎng)5-Fluorouracil
CL-0257BC-009(人癌細胞)5×106cells/瓶×29-(溴甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)9-(Bromomethyl)acridine

RP2 Others Human 人 XRP2 / RP2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) DBD-COCl [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,3-苯并惡二唑](>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)DBD-COCl [=4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(N-chloroformylmethyl-N-methylamino)-2,1,3-benzoxadiazole]

人成纖維細胞cDNAHPrF cDNANBD-COCl [=4-(N-氯甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,3-苯并惡二唑](>92.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>92.0%(T)NBD-COCl [=4-(N-Chloroformylmethyl-N-methylamino)-7-nitro-2,1,3-benzoxadiazole]

C6細胞，腦細胞 人肺巨細胞癌細胞,HLAmP細胞 肺大動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)D-(-)-扁桃酸;R-扁桃酸質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR(R)-(?)-Mandelic acid

犬腎細胞;MDCK(NBL-2)1-氨基海因鹽酸鹽;AHD，1-氨基乙內(nèi)酰脲鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR1-Aminohydantoin
TNFRSF1A Others Rat 大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 人細胞裂解液 (陽性對照) (R)-賴諾普利鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：美國進口(R)-Lisinopril  Salt

真皮成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL賴諾普利環(huán)己基類似物質(zhì)量規(guī)格：美國進口Lisinopril Cyclohexyl Analog

WB-F344細胞，大鼠肝上皮樣干細胞 HL-60(原髓細胞) 大鼠肝細胞瘤;H4-II-E-C3洛匹那韋-d8質(zhì)量規(guī)格：美國進口Lopinavir-d8

EFNA1 Protein Rat 重組大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 蛋白 (His 標簽)洛匹那韋代謝產(chǎn)物M-1質(zhì)量規(guī)格：美國進口Lopinavir Metabolite M-1

ZR-75-1(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 C3H/An小鼠結(jié)締組織細胞(L929-TK-);LTK-(S)-比卡魯胺質(zhì)量規(guī)格：美國進口(S)-Bicalutamide
恒河猴腎細胞培養(yǎng)M1 小鼠細胞癸酸甲酯(Standard for GC ,≥99.5%(GC))Methyl decanoate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC ,≥99.5%(GC)

PLA2G7 Others Human 人 PLA2G7 / PAFAH 人細胞裂解液 (陽性對照) 甲酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))Methyl laurate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)

人胚胎肌肉組織來源細胞;CCC-HSM-2棕櫚酸甲酯(Standard for GC,≥98.0%(GC))Methyl palmitate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥98.0%(GC)

FUT8 Others Human 人 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 水楊酸甲酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Methyl salicylate質(zhì)量規(guī)格：standard for GC,≥99.5%(GC)

VERO細胞衍生株;SVP油酸甲酯(Standard for GC,≥99%(GC))Methyl oleate質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99%(GC)
收到恒河猴腎細胞培養(yǎng)處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。