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人外周淋巴細胞說明書冷凍保存細胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細胞凍存步驟：

資源名稱　人外周淋巴細胞說明書
種屬:U266B1

形態(tài):淋巴母細胞樣

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS　

生長特性:懸浮生長
細胞分類：
第一種：
是凍存產品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說是細胞自身不行，還是復蘇沒操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的zui好方式，快遞時間也很難控制，多種因素影響產品的質量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：產品僅用于科研
是我們復蘇好細胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質量保證：我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實驗室擴增、凍存，凍存的產品全部經過QC檢測，100%進口來源，100%保證5代以內，活力>95%，無細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養(yǎng)過程：

細胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。
以下是人外周淋巴細胞說明書的相關熱銷產品：
hMo-PB-c single donorpre-screened 外周血來源的人類單核細胞，單一來源，預選型 10 million 人絨毛間充質成纖維細胞HVMF化銫(用于高通量質譜,99.9995%)質量規(guī)格：分析標準品，用于高通量質譜,99.9995%Cesium iodide

MDA-MB-231(ATCC來源), 人癌細胞1,3-二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC))質量規(guī)格：用于GC-HS,≥99.8%(GC)1,3-Dimethyl-2-imidazolidinone

GPC3 Others Mouse 小鼠 Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 甲地孕酮(標準品)質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Megestrol base

人正常上皮細胞;RWPE-13-縮酮質量規(guī)格：>99%,BREstradiene dione-3-keta

狗腎細胞隆突型;MDCK superdome T細胞，CTLL-2細胞 RTE細胞，大鼠氣管上皮細胞索拉非尼質量規(guī)格：>95%,BR,可用于細胞培養(yǎng)Sorafenib base
CL-0321BEL-7405(人細胞)5×106cells/瓶×2尿苷；尿嘧啶核苷質量規(guī)格：>99%,BR，可用于細胞培養(yǎng)Uridine

MANF Others Mouse 小鼠 MANF / ARMET 人細胞裂解液 (陽性對照) 尿嘧啶核苷,尿苷(標準品)質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Uridine

小鼠肺大內皮細胞完全培養(yǎng)基 100mLUTP;5‘-三1酸尿苷三鈉質量規(guī)格：>98%,BRUTP, Tri Salt

LLC1[LL/2]小鼠Lewis細胞 LLC1[LL/2] mice with Lewis lung cancer cells 1640+10% FBSFmoc-N'-甲基三苯甲基-L-賴氨酸質量規(guī)格：0.98Fmoc-Lys(Mtt)-OH

IL1B Protein Human 重組人 IL-1 beta / IL1B 蛋白 (pro form, His 標簽)芴甲氧羰基-O-芐基-L-蘇氨酸質量規(guī)格：0.98Fmoc-Thr(Bzl)-OH
ITGA5&ITGB6 Others Human 人 ITGA5 & ITGB6 Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-溴蒽(>97.0%(GC))質量規(guī)格：>97.0%(GC)2-Bromoanthracene

CL-0465WERI-Rb-1(人視網膜神經細胞)5×106cells/瓶×29,10-雙(二乙基膦甲基)蒽(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)9,10-Bis(diethylphosphonomethyl)anthracene

BRL細胞，肝細胞 人細胞,9L-E細胞 人上皮細胞RNAHMEpiC miRNA5 μg9-溴蒽(>99.0%(GC)(HPLC))質量規(guī)格：>99.0%(GC)(HPLC)9-Bromoanthracene

獼猴肌肉細胞;MMm72-溴-9,10-二苯基蒽(>95.0%(GC))質量規(guī)格：>95.0%(GC)2-Bromo-9,10-diphenylanthracene

ENG Others Human 人 Endoglin / CD105 / ENG 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-溴-4-正辛基苯(>99.0%(GC)(T))質量規(guī)格：>99.0%(GC)(T)trans-4-Butylcyclohexanecarboxylic Acid
人外周淋巴細胞說明書人臍內皮細胞(HVVEC)( 5×105 ) SK-MEL-1, 人皮膚色素瘤細胞 Human核黃素1酸鈉混合物（標準品）Riboflavin-5-phosphate 質量規(guī)格：供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗

人胚胎心肌組織來源細胞;CCC-HEH-2麥芽糖（標準品）D-(+)-Maltose monohydrate 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

IL17A Others Human 人 IL17 / IL17A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 尿素（標準品）Urea質量規(guī)格：含量測定

CL-0285L-O2(人正常肝細胞)5×106cells/瓶×2生物素（標準品）D-Biotin質量規(guī)格：HPLC法含量測定

hDPSCs, 人前牙髓干細胞 小鼠胚胎成纖維細胞，3T6swiss細胞 Hs 1.Tes(正常人細胞)特非那定（標準品）Terfenadine質量規(guī)格：含量測定
收到人外周淋巴細胞說明書處理方法
產品僅用于科研1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。