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雜交瘤(抗CD3)說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　雜交瘤(抗CD3)說明書
種屬:OKT 3

類型:細(xì)胞類型:：雜交瘤；B淋巴細(xì)胞

形態(tài):淋巴母細(xì)胞

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:IMDM培養(yǎng)基(GIBCO,貨號12200036)，80%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，20%。 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度。

生長特性:半貼壁生長
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是雜交瘤(抗CD3)說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
MME Others Human 人 CD10 / MME / Neprilysin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸哌羅匹隆質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRPerospirone

SK-MEL-1, 人皮膚色素瘤細(xì)胞替拉扎明質(zhì)量規(guī)格：>98%Tirapazamine(SR259075; Win59075; SR4233)

SIGLEC5 Others Human 人 SIGLEC5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 癸酸甲酯(Standard for GC ,≥99.5%(GC))質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC ,≥99.5%(GC)Methyl decanoate

人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-1甲酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥99.5%(GC)Methyl laurate

HK-2細(xì)胞，人腎小管近段上皮細(xì)胞 負(fù)鼠腎細(xì)胞,OK細(xì)胞 CL-0389NCI-H1688(人典型小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2棕櫚酸甲酯(Standard for GC,≥98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：Standard for GC,≥98.0%(GC)Methyl palmitate
CM-H135人脈絡(luò)膜微細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL五水合硫酸金雀花堿/硫酸鷹爪豆堿質(zhì)量規(guī)格：≥97%,BR(-)-Sparteini Sulfas

DPYS Others Human 人 DPYS / Dihydropyrimidinase 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 辛弗林(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Synephrine

人*內(nèi)皮細(xì)胞HSEC泛昔洛韋（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品Famciclovir

非洲綠猴腎細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);COS-1 [COS1] 轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞，293細(xì)胞 QGY-7703(細(xì)胞)氟達(dá)拉濱1酸酯質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP,BRFludarabine Phosphate

人細(xì)胞;A549 [A-549]噴昔洛韋質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,細(xì)胞培養(yǎng)級Penciclovir
EPCAM Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Crovatin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Crovatin

人細(xì)胞;A549 [A-549]Croverin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Croverin

家貓腎細(xì)胞;CATK1 肝細(xì)胞，HL-7702細(xì)胞 MMQ細(xì)胞，大鼠細(xì)胞levatin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品levatin

人臍內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC-C蒼耳亭（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品 Xanthatin

RBP4 Others Mouse 小鼠 RBP4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) PR171關(guān)鍵中間體I 質(zhì)量規(guī)格：>97%PR171 intermedaite I
雜交瘤(抗CD3)說明書SIGIRR Others Human 人 SIGIRR / TIR8 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 磺胺噻唑鈉鹽Sulfathiazole  salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

人臍內(nèi)皮細(xì)胞;HUV-EC匹格列酮-d4Pioglitazone-d4質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

PSG6 Others Human 人 PSG6 / PSG10 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 羥基匹格列酮（M-Ⅶ）Hydroxy Pioglitazone (M-VII)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

CL-0302PA319(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×25-去乙基5-羧基匹格列酮5-Desethyl 5-Carboxy Pioglitazone質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

GC-1, 鼠精原細(xì)胞 swiss鼠胚胎成纖維細(xì)胞，3T3 swiss細(xì)胞 NCL-H548(人*癌細(xì)胞)酮基匹格列酮（M-Ⅲ）Keto Pioglitazone (M-III)質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
收到雜交瘤(抗CD3)說明書處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。