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小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞（干細(xì)胞庫(kù)保藏） 冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱(chēng)　小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞（干細(xì)胞庫(kù)保藏）
種屬：P815

形態(tài)：懸浮

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815 完全培養(yǎng)液 配方（100 ml）： DMEM (Invitrogen, 12430) 89 ml FBS (Gibco) 10 ml Sodium Pyruvate 100 mM Solution（invitrogen 11360070） 1 ml

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)；部分細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：產(chǎn)品僅用于科研
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞（干細(xì)胞庫(kù)保藏） 的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
人肺大內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL維生素B1Vitamin B1質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP

SK-MEL-1細(xì)胞，人皮膚色素瘤細(xì)胞 德氏乳桿菌乳酸亞種 人十二脂腸腺癌;HuTu-80維生素B12(標(biāo)準(zhǔn)品)vitamin B12質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%，標(biāo)準(zhǔn)品

ANGPTL7 Protein Canine 重組狗 ANGPTL7 / Angiopoietin-like 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)10-十一炔-1-醇(>95.0%(GC))10-Undecyn-1-ol質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)

KG-1(人) 5×106cells/瓶×2 大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 亞甲基二水楊酸(異構(gòu)體的混合物)(>90.0%(T))Methylenedisalicylic Acid (mixture of isomers)質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(T)

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5B;Vero-HCV-NS5B2-氨基-2',5-二氯二苯甲酮(>98.0%(N))2-Amino-2',5-dichlorobenzophenone質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(N)
KLK1 Others Human 人 KLK-1 / Kallikrein-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) D-阿拉伯糖質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRD-(-)-Arabinose

CM-H044人肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLD-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品D-arabinose

HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 醋酸組氨瑞林 質(zhì)量規(guī)格：BR,度>98%Histrelin Acetate

小鼠牙細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL青霉素V鉀質(zhì)量規(guī)格：1440~1680 U/mg,BRPenicillin V potassium salt

NCI-H929-CMV-EGFP(穩(wěn)定株)人細(xì)胞 NCI-H929-CMV-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅活)2'-脫氧肌苷質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR2'-deoxyinosine
人上皮細(xì)胞cDNAHBEpiC cDNAIKK-16,選擇性IKK抑制劑質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRIKK16

IL1R1 Others Rat 大鼠 IL1R1 / CD121a 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 曲格列汀琥珀酸鹽 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTrelagliptin succinate；SYR-472

3T3A31 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞2-[2-(2-t-Boc-氨基乙氧基)乙氧基]乙醇質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口原裝2-[2-(2-t-Boc-aminoethoxy)ethoxy]ethanol

CL-0238U-87 MG(人神經(jīng)細(xì)胞)5×106cells/瓶×22'-脫氧-2',2'-二氟尿嘧啶核苷質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口原裝,97%2’,2’-Difluoro-2’-deoxyuridine 

MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元AV-951質(zhì)量規(guī)格：>98%,VEGFR抑制劑Tivozanib, AV951
小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞（干細(xì)胞庫(kù)保藏） C6/36 白紋伊蚊細(xì)胞尼羅替尼（標(biāo)準(zhǔn)品）Nilotinib質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CL-0102Hep 3B(人細(xì)胞)5×106cells/瓶×2螺旋霉素Spiramycin質(zhì)量規(guī)格：>3900IU/MG,EP,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞螺旋霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Spiramycin質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品

人膀胱上皮永生化細(xì)胞;SV-HUC-1 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL螺內(nèi)酯Spironolactone質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP 32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人真皮微內(nèi)皮細(xì)胞RNAHDMEC miRNA5 μg螺內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Spironolactone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
收到小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞（干細(xì)胞庫(kù)保藏） 處理方法
產(chǎn)品僅用于科研1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。