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McCoy's 5a完全培養(yǎng)基：說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　McCoy's 5a完全培養(yǎng)基：說明書
種屬：McCoy's 5a complete medium

提供形式：100ml/瓶，液體

安全等級：1

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：90%McCoy’s 5a+10%FBS
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是McCoy's 5a完全培養(yǎng)基：說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
KDR Others Mouse 小鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 米替福新Miltefosine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠外膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL米替福新(標(biāo)準(zhǔn)品)Miltefosine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

NRK大鼠腎細(xì)胞 In NRK rat kidney cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS6'-羥甲基辛伐他汀6'-Hydroxymethyl Simvastatin質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

IFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (His 標(biāo)簽)辛伐他汀羥基酸銨鹽Simvastatin Hydroxy Acid, Ammonium Salt質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口

HLF-a(人肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 藤黃微球菌/騰黃八疊球菌N-氧基索拉菲尼Sorafenib N-Oxide質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
SELPLG Others Human 人 RPSGL-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸異丙嗪質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分Promethazine

CM-M094小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL阿戈美拉?。?/span>II型）質(zhì)量規(guī)格：>99%，II晶型Agomelatine

MFI2 Others Mouse 小鼠 MFI2 / CD228 / melanoansferrin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 派洛寧Y(Ind Grade)質(zhì)量規(guī)格：Ind GradePyronin Y

小鼠膀胱上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL魚精蛋白硫酸鹽來源于鮭魚 質(zhì)量規(guī)格：Grade II,sigma分裝Protamine sulfate from Salmom

4T1小鼠癌細(xì)胞 Mouse breast cancer cell 4T1 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS5-溴-4-氯-3-吲哚基1酸鹽鈉鹽(分子生物學(xué)級)質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級BCIP, di salt
雙位點(diǎn)HC-kit受體細(xì)胞株;DMF7鹽酸地匹福林（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Dipivefrin

PTH1R Others Human 人 PTH1R / PTHR1 / PTH1 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甲基麥冬黃酮A（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品Methylophiopogonone A

NCI-H1650 人非小細(xì)胞細(xì)胞噴昔洛韋（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Penciclovir

SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人*癌細(xì)胞貝那普利拉/苯那普利拉（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用Benazeprilat

THPO Protein Human 重組人 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標(biāo)簽)奧美拉唑硫化物質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口Omeprazole Sulfide
McCoy's 5a完全培養(yǎng)基：說明書IFNA14 Others Mouse 小鼠 IFNA14 / Ierferon alpha-14 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 三(4,7-二苯基-1,10-菲繞啉酯)氯化鈉釕（1mM 溶液）Tris(bathophenanthrolinedisulfonate)ruthenium(II)  salt solution質(zhì)量規(guī)格：1mM，BC

JF305 *癌胰蛋白酶原Trypsinogen >2500U/mg from bovine pancreas質(zhì)量規(guī)格：BC

DU 145人細(xì)胞 DU 145 human prostate cancer cell F-12+10%FBS色胺(>Tryptamine質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CTF1 Protein Human 重組人 Cardioophin-1 / CTF1 蛋白三氧化鎢(>99%,BC)Tungsten (VI) oxide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC

小鼠神經(jīng)皮質(zhì)細(xì)胞(MN-c)(1×106) LncaP, 人細(xì)胞 Human碳化鎢200(>99%,BC)Tungsten carbide-200質(zhì)量規(guī)格：>99%,BC
收到McCoy's 5a完全培養(yǎng)基：說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。