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資源名稱　人直腸腺癌細(xì)胞
種屬：SW1463 [SW 1463, SW-1463]

類型：貼壁生長

形態(tài)：上皮樣細(xì)胞

分離基物：直腸腺癌；女性

提供形式：T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管

安全等級：1

模式：菌株未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基：90%L-15+10%FBS

傳代方法：Volumes used in this protocol are for 75 cm2 flask; proportionally reduce or increase amount of dissociation medium for culture vessels of other sizes. <br>Subculture just prior to confluency Remove and discard culture medium. Briefly rinse the cell layer with 0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA solution to remove all traces of serum which contains trypsin inhibitor. Add 2.0 to 3.0 mL of Trypsin-EDTA solution to flask and observe cells under an inverted microscope until cell layer is dispersed (usually within 5 to 15 minutes). Note: To avoid clumping do not agitate the cells by hitting or shaking the flask while waiting for the cells to detach.&#160; Cells that are difficult to detach may be placed at 37°C to facilitate dispersal. Add 6.0 to 8.0 mof complete growth medium and aspirate cells by gently pipetting.&#160; To remove trypsin-EDTA solution, transfer cell suspension to the centrifuge tube and spin at approximately 125 x g for 5 to10 minutes. Discard supernatant and resuspend cells in fresh growth medium.&#160; Add appropriate aliquots of cell suspension to new culture vessels. Incubate cultures at 37°C without CO2. Subcultivation Ratio: A subcultivation ratio of 1:3 to 1:8 is recommended <br>Medium Renewal: 1 to 2 times per week<br>

生長條件：Atmosphere: Air, 100%

存儲條件：90%FBS+10%DMSO
人直腸腺癌細(xì)胞培養(yǎng)來源可靠（源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等知名品牌），活力>95%，貼壁性好。我們從試劑、包被器皿、凍存原代細(xì)胞、新鮮原代細(xì)胞、原代細(xì)胞的分子學(xué)實驗等提供全程服務(wù)。我司擁有專業(yè)的實驗室，可無菌操作并提供相關(guān)科研項目解決方案以及實驗服務(wù)。

培養(yǎng)操作步驟：
人直腸腺癌細(xì)胞培養(yǎng)1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布； 
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）； 
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時； 
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片完全浸在培養(yǎng)液中； 
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。 
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細(xì)胞
在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用*化等方法使細(xì)胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備  記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等； 
適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟可提供大量、同一時期、重復(fù)性好的、生物學(xué)性狀相似的實驗對象。

操作流程：
1.1主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細(xì)胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細(xì)胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預(yù)熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細(xì)胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細(xì)胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細(xì)胞48h換液1次，細(xì)胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細(xì)胞脫壁、懸浮、分散，為使細(xì)胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細(xì)胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細(xì)胞。
1.3 細(xì)胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細(xì)胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細(xì)胞的計數(shù) 常規(guī)消化細(xì)胞，待細(xì)胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細(xì)胞懸液。在細(xì)胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細(xì)胞數(shù)，按公式計算出細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞數(shù)/ml原液＝(四方格細(xì)胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細(xì)胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細(xì)胞，以0.25％胰酶消化成單細(xì)胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細(xì)胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細(xì)胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細(xì)胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細(xì)胞數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。 
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細(xì)胞用胰酶消化制成單細(xì)胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細(xì)胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細(xì)胞生長曲線

以下是公司正在在熱銷的產(chǎn)品：
ANGPTL4 Protein Mouse 重組小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽)1,5-二溴蒽(>97.0%(GC))1,5-Dibromoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

Jurkat, Clone E6-1 (人急性T細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 SELP / selectin P / P-selectin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1,8-二蒽(>98.0%(GC))1,8-Diiodoanthracene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

獼猴肺細(xì)胞;MML29-酮基利培酮9-Keto Risperidone質(zhì)量規(guī)格：美國進口

人氣管平滑肌細(xì)胞 (HTSMC)( 5×105 )6-去氟-6-羥基利培酮6-Desfluoro-6-hydroxy Risperidone質(zhì)量規(guī)格：美國進口

CL-0260BC-021(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×27-羥基利培酮7-Hydroxy Risperidone質(zhì)量規(guī)格：美國進口
SMYD3 Others Human 人 SMYD3 / ZMYND1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸伐昔洛韋/鹽酸萬乃洛韋（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Valacyclovir HCl

人表皮色素細(xì)胞-淺色素總RNAHEM-l NA維庫溴銨質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRVecuronium Bromide

RT4細(xì)胞，細(xì)胞 人胚肺細(xì)胞,MRC-5細(xì)胞 原代平滑肌細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml維庫溴銨（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Vecuronium Bromide

豹貓肺成纖維樣細(xì)胞;LCL4GDPNa2;5’-二1酸鳥苷二鈉質(zhì)量規(guī)格：>90%,BRGDP Di Salt

HA Others H5N1 甲型 H5N1 (A/Anhui/1/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) SU11274質(zhì)量規(guī)格：>98%,選擇性的Met抑制劑SU-11274
SGC-7901 人細(xì)胞R-聯(lián)萘酚1酸酯質(zhì)量規(guī)格：>99%(R)-(-)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl hydrogenphosphate

CL-0410P3X63Ag8.653(小鼠細(xì)胞)5×106cells/瓶×22,6-二氯嘌呤質(zhì)量規(guī)格：>97%,原裝進口2,6-Dichloropurine

mCF, 小鼠*成纖維細(xì)胞2,4-二氯喹唑啉質(zhì)量規(guī)格：>98%2,4-Dichloroquinazoline

人胚腎上皮細(xì)胞系;KiMA 人直腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL9-氯甲基蒽質(zhì)量規(guī)格：>98%，進口原裝9-(Chloromethyl)anthracene

人纖維細(xì)胞;HT-10801-溴蒽(>97.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)1-Bromoanthracene
人直腸腺癌細(xì)胞培養(yǎng)MLTC-1(小鼠間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2西吡氯銨（標(biāo)準(zhǔn)品）Cetylpyridinium chloride質(zhì)量規(guī)格：含量測定

Promocell C-23110 Fibroblast Growth Medium KIT,成纖維細(xì)胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml硫酸羥氯喹（標(biāo)準(zhǔn)品）Hydroxychloroquine sulfate質(zhì)量規(guī)格：UV法溶出度檢查

細(xì)胞車葉草苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Asperuloside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

TSLP Others Mouse 小鼠 TSLP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Galeterone (TOK001)TOK-001質(zhì)量規(guī)格：>98%,CYP17抑制劑

G422瘤 神經(jīng)山柰酚-3-槐二糖-7-鼠李糖苷Kaempferol 3-sophoroside-7-rhamnoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥85%,標(biāo)準(zhǔn)品