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人肺腺癌順鉑耐藥性細(xì)胞說明書冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人肺腺癌順鉑耐藥性細(xì)胞說明書
種屬:A549/DDP

模式菌株:未知
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人肺腺癌順鉑耐藥性細(xì)胞說明書的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
人胚肝二倍體細(xì)胞;CCC-HEL-1 人上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL環(huán)1酰胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Cyclophosphamide質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

人肺癌細(xì)胞;NCI-H1650氨1汀硫醇二鹽酸Amifostine Thiol Di質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 貝那普利游離堿Benazepril Free base質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

A172人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 A172 human glioblastoma cells DMEM+10% FBS拉莫三嗪-13C3Lamotrigine-13C3質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口

CRT細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞 曲霉 人海馬趾星形膠質(zhì)細(xì)胞RNAHA-h miRNA5 μgD-半乳糖醛酸甲酯D-Galacturonic acid methyl ester質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口
人小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(HM) ( 5×105 )紅霉素乳糖醛酸質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Erythromycin lactobionate

U266B1 [U266], 人細(xì)胞脫氫尼索地平質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Dehydro Nisoldipine

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;BT-474 大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL4-羥基尼索地平質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口4-Hydroxy Nisoldipine

MFC 小鼠細(xì)胞外消旋布洛芬酰胺質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口rac-Ibuprofen Amide

IL21R Others Human 人 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 核黃素1酸鈉混合物（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)Riboflavin-5-phosphate
RAW 264.7細(xì)胞，小鼠單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞 溶組織梭菌Closidium histolyticum 水牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;WB-S3熒光素100克

CCL22 Protein Human 重組人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 標(biāo)簽)5-氧基-2-巰基本并咪坐 99% 5-Mqthoxy-2-mqrccptobqnzimidczolq 3702-78-1

PA317(小鼠成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD1E & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) RIBOREADY100BRNALADDERRNA laddeTFrozen

人低分化;GLC-82 [GLC82]血清兔抗HRPshēng huà shì jì容量：100克

人毛發(fā)基質(zhì)細(xì)胞(HHZMC)( 5×105 )PseudomonasIsolationAgar 500g原裝 BD 292710
人肺腺癌順鉑耐藥性細(xì)胞說明書PCSK9 Others Rat 大鼠 PCSK9 / NARC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 鹽酸羅格列酮（標(biāo)準(zhǔn)品）rosiglitazone 質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

原代滑膜皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml苯溴馬?。?biāo)準(zhǔn)品）BENZBROMARONE質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

MAP2K2 Others Human 人 MEK2 / MAP2K2 / MKK2 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 鹽酸布替萘芬（標(biāo)準(zhǔn)品）Butenafine HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21鹽酸托烷司瓊（標(biāo)準(zhǔn)品）Tropisetron 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

Neuro-2A細(xì)胞，腦神經(jīng)瘤細(xì)胞 人細(xì)胞,HepG2.2.1.5細(xì)胞 CM-M130小鼠肝外膽管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL鹽酸托烷司瓊Tropisetron 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
收到人肺腺癌順鉑耐藥性細(xì)胞說明書處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。