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人細(xì)胞（2013年新引進(jìn)）（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書(shū)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱　人細(xì)胞（2013年新引進(jìn)）（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書(shū)
種屬:NCI-N87

類型:胃

形態(tài):上皮樣

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:1. 人細(xì)胞NCI-N87完全培養(yǎng)液配方（100 ml）： 　　 RPMI 1640 Medium (Invitrogen, 11875-093) 88 ml 　　 FBS (Gibco) 10 ml Glutamax（invitrogen 35050）

傳代方法:（注：該細(xì)胞貼壁較慢，建議復(fù)蘇后讓細(xì)胞貼壁48h后再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)操作。）

生長(zhǎng)條件:氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度

生長(zhǎng)特性:貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞分類：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是人細(xì)胞（2013年新引進(jìn)）（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書(shū)的相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
STO(小鼠胚成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL18RAP / IL1R7 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 變色酸鈉,鉻變酸二鈉Chromotropic acid di salt dihydrate質(zhì)量規(guī)格：AR

人虹膜色素上皮細(xì)胞HIPEpiC溴百里酚藍(lán)鈉鹽Bromothymol blue  salt質(zhì)量規(guī)格：AR

EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 特地唑胺游離堿Tedizolid free base質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠腸動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL特地唑胺;特地唑胺1酸酯Tedizolid phosphate;TR-701FA質(zhì)量規(guī)格：>99%;BR

CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性細(xì)胞T細(xì)胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 滅活血清3-甲基-2-苯并噻唑酮腙鹽酸鹽，水合MBTH  hydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
小鼠角膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氘代苯-D6(0.5ml x 10 )質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%Benzene-D6

OPM-2-CMV-EGFP(穩(wěn)定株)人細(xì)胞 OPM-2-CMV-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(熱滅活)氘代苯-D6(0.55ml x 10)質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%+0.03%TMSBenzene-D6

IL21R Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 蛋白 (His 標(biāo)簽)氘代苯-D6(10g )質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%Benzene-D6

人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞(HA-sp)(1×106) 人腦微內(nèi)皮細(xì)胞 Human氘代苯-D6(10g )質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%+0.03%TMSBenzene-D6

CM-H057人卵巢微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL氘代苯-D6(25g)質(zhì)量規(guī)格：D,99.5%Benzene-D6
雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7 小鼠皮下脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLD-醇（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：95%，標(biāo)準(zhǔn)品D-Pinitol

HK-2, 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞 Human果菊苷（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Echinacoside

MEP1A Others Human 人 MEP1A / PPHA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 蘿酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Usnic acid

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HAECL酸棗仁皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Jujuboside A

TNFSF13B Others Cynomolgus 食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) D-焦谷氨酸（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法有關(guān)物質(zhì)檢查D-Pyroglutamic acid
人細(xì)胞（2013年新引進(jìn)）（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書(shū)HFDPC-c 人類的毛細(xì)胞(HFDPC) 500,000cells 膀胱平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)銥標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基質(zhì)：2.0mol/L鹽酸)Iridium standard solution質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基質(zhì)：2.0mol/L鹽酸

平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鎳標(biāo)準(zhǔn)溶液(500mg/L,溶劑：1%硝酸)Nickel standard質(zhì)量規(guī)格：500mg/L,溶劑：1%硝酸

IFNA8 Others Human 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/mL,基體:1%HCl)Potassium standard質(zhì)量規(guī)格：100μg/mL,基體:1%HCl

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系*);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA鐠標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/mL,基體：10%HCl)Praseodymium standard質(zhì)量規(guī)格：1000μg/mL,基體：10%HCl

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr- 喉表皮樣癌細(xì)胞，HEp-2細(xì)胞 SF-9細(xì)胞，昆蟲(chóng)細(xì)胞系鎢標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH)Tungsten solution質(zhì)量規(guī)格：1000μg/ml,基體：0.1mol/LNaOH
收到人細(xì)胞（2013年新引進(jìn)）（干細(xì)胞庫(kù)保藏）說(shuō)明書(shū)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。