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小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系培養(yǎng)冷凍保存細(xì)胞之方法：

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
細(xì)胞凍存步驟：

資源名稱(chēng)　小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系培養(yǎng)
種屬:HT22

類(lèi)型:貼壁生長(zhǎng)

形態(tài):神經(jīng)元細(xì)胞樣

分離基物:小鼠，海馬

安全等級(jí):1

模式菌株:未知

培養(yǎng)方法

培養(yǎng)基:90%DMEM+ 10%FBS

傳代方法:傳代比例建議1:2-1:6.

生長(zhǎng)條件:37攝氏度，5%二氧化碳，95%空氣

存儲(chǔ)條件:90%FBS+10%DMSO
細(xì)胞分類(lèi)：
第一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運(yùn)輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因?yàn)閺?fù)蘇手法對(duì)于細(xì)胞狀態(tài)影響較大，一旦細(xì)胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細(xì)胞自身不行，還是復(fù)蘇沒(méi)操作好；另外溫度對(duì)細(xì)胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細(xì)胞儲(chǔ)存的zui好方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運(yùn)輸需要額外添加400元的運(yùn)費(fèi)(順豐)。
第二種：
是我們復(fù)蘇好細(xì)胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養(yǎng)基常溫運(yùn)輸給客戶(hù)，排除復(fù)蘇造成影響，常溫運(yùn)輸也對(duì)細(xì)胞影響也不大，只需加25元運(yùn)費(fèi)(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購(gòu)買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè)，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?nèi)，活力>95%，無(wú)細(xì)菌、真菌、支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程：

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，15%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%完全培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
以下是小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系培養(yǎng)的相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：
人小腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL達(dá)托霉素Daptomycin質(zhì)量規(guī)格：≥930μg/mg,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

P388細(xì)胞，小鼠細(xì)胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1達(dá)托霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Daptomycin質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定

CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標(biāo)簽)鹽酸柔紅霉素Daunorubicin HCl質(zhì)量規(guī)格：度大于97%含量84.0-102%,USP30

P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸柔紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Daunorubicin HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT 116 [HCT116]鹽酸柔紅霉素(進(jìn)口)Daunorubicin HCl質(zhì)量規(guī)格：USP,進(jìn)分sigmaD8809
原代軟骨細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1mlN-去羥乙基達(dá)沙替尼-d8質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口N-Deshydroxyethyl Dasatinib

FCER2 Others Rat 大鼠 CD23 / FCER2 / FCER2A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 4'-羥基達(dá)沙替尼質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口4'-Hydroxy Dasatinib

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;CTLA4 Ig-2414-氯柔紅霉素質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口14-Chloro Daunorubicin

HLF-02細(xì)胞，人胚肺二倍體細(xì)胞 大鼠肝星形細(xì)胞,CFSC-3H & 5H細(xì)胞 CM-M120小鼠角膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL多1紫杉醇代謝物M4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Docetaxel Metabolite M4

SK-Hep-1(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2羥基脫氫硝苯地平羧酸鹽質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Hydroxydehydro Nifedipine Carboxylate
KMB 人胚肺成纖維樣細(xì)胞1,1-環(huán)丁基二酸，英文名或英文縮寫(xiě)：1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid，級(jí)別：AR，99%，規(guī)格：5克

CM-H091人大隱內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL磺醋銨 cmmonium sulfcmctq 7773-06-0

GH3, 大鼠垂體生長(zhǎng)激素腺瘤D-天門(mén)冬酸，英文名或英文縮寫(xiě)：D-Aspartic acid dimetxyl ester xy7nochloride，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：10克

人癌細(xì)胞;MDA-MB-435S 人視網(wǎng)膜微內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL雙岐桿菌BS培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100毫升

人平滑肌細(xì)胞總RNAHCSMC NA(2-(環(huán)已胺)-1-乙磺酸)
小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系培養(yǎng)角膜內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 100)Vacuum pump oil質(zhì)量規(guī)格：Viscosity Grade 100

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記) 人，SW 1271[SW-1271;SW1271]細(xì)胞 LLC Lewis(細(xì)胞)優(yōu)級(jí)真空泵油(Viscosity Grade 150)Vacuum pump oil質(zhì)量規(guī)格：Viscosity Grade 150

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;BE(2)-M17紫尿酸 一水合物(97%)Violuric acid monohydrate質(zhì)量規(guī)格：0.97

TIMD4 Others Mouse 小鼠 TIMD4 / TIM4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 生育酚乙酸酯(標(biāo)準(zhǔn)品)Vitamin E acetate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞;TPO-CHO-I1效唑(分析標(biāo)準(zhǔn)品97.5%)Uniconazole質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品97.5%
收到小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系培養(yǎng)處理方法
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。