豬粘蛋白5B（MUC5B）ELISA試劑盒在科研實驗中廣泛應(yīng)用，實驗過程中可能因操作或樣本處理不當(dāng)導(dǎo)致結(jié)果偏差。以下結(jié)合試劑盒特性及通用ELISA實驗經(jīng)驗，總結(jié)常見問題及解決方法。
樣本處理相關(guān)問題及對策
溶血或高血脂樣本干擾
問題表現(xiàn)：背景值升高或檢測結(jié)果異常。
解決方法：避免使用溶血、高血脂樣本；若血清中存在大量顆粒，檢測前需1000×g離心10分鐘或過濾。
樣本保存不當(dāng)導(dǎo)致降解
問題表現(xiàn)：目標(biāo)蛋白活性降低，信號減弱。
解決方法：樣本采集后立即處理，-70℃分裝保存，避免反復(fù)凍融；檢測前需徹底解凍并混勻。
NaN?防腐劑影響
問題表現(xiàn)：酶活性受抑制，信號消失。
解決方法：禁用含NaN?的樣本，因其會抑制辣根過氧化物酶（HRP）活性。試劑使用與操作誤差的應(yīng)對措施試劑混用或變質(zhì)
問題表現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線異常，重復(fù)性差。
解決方法：不同批號試劑不混用，試劑需按標(biāo)簽說明儲存（如底物B需避光保存），開封后盡快使用。加樣順序與時間不一致
問題表現(xiàn)：孔間反應(yīng)差異大，結(jié)果不可靠。
解決方法：嚴(yán)格按說明書順序加樣，確保所有孔溫育時間一致；使用一次性吸頭避免交叉污染。洗滌不充分或拍干不當(dāng)
問題表現(xiàn)：背景過高或信號殘留。
解決方法：洗滌時確保緩沖液充滿孔內(nèi)，拍干時避免吸水紙接觸反應(yīng)孔；使用干凈容器配置洗滌液并充分混勻。